Testiranje PCR (verižna reakcija polimeraze) je jedrna tehnologija pri molekularni diagnostiki. Standardizacija njegovih procesov embalaže in testiranja neposredno vpliva na natančnost in biološko varnost rezultatov. Ta članek ponuja strokovno perspektivo ključnih točk nadzora kakovosti v celotnem postopku testiranja PCR.
Prejemanje vzorca in predobdelava sta prvi koraki v postopku. Laboratoriji morajo strogo preveriti identifikacijo vzorca, prevozne pogoje in čas skladiščenja, da se zagotovi celovitost vzorca. Po prejemu je treba vzorce oštevilčiti in registrirati v kabinetu za biološko varnost in opraviti pred - postopkom obdelave, kot sta liza in ekstrakcija nukleinske kisline na podlagi testa. V tej fazi je potreben dva - sistem za preverjanje osebe, da preprečita kontaminacijo -.
Priprava reakcijskega sistema PCR je treba izvesti znotraj čiste klopi. Operaterji morajo nositi zaščitno opremo stopnje 3 in uporabljati nukleaze - brezplačni potrošni material. Priprava reagenta se drži načela "enosmernega delovnega toka", ki se premika iz območja priprave reagenta na območje obdelave vzorca in nato na območje ojačitve. Za spremljanje eksperimentalne veljavnosti je treba vključiti negativne kontrole, pozitivne kontrole in notranje kontrole.
Med fazo ojačanja in testiranja mora biti PCR instrument pred - umerjeni in temperaturni kolesarski parametri preverjeni. Reakcijski postopek običajno vključuje tri korake: denaturacija (94 - 95 stopinj), žarjenje (50-65 stopinj) in razširitev (72 stopinj). Število ciklov se prilagodi na podlagi cilja zaznavanja. Fluorescenčni PCR v realnem času zahteva tudi spremljanje praga fluorescenčnega signala določenih kanalov.
Analiza rezultatov in poročanje morajo opraviti usposobljeni tehniki. Surove podatke morata pregledati vsaj dva strokovnjaka za potrditev morfologije ojačevalne krivulje, verodostojnosti vrednosti CT in skladnosti materialov za nadzor kakovosti s standardi. Končno poročilo mora vsebovati informacije o testni metodologiji, osnovo za razlago rezultatov in izjavo o omejitvah testa.
Celoten postopek se strogo drži ISO 15189 in ustreznih specifikacij CDC. Za zagotovitev zanesljivosti in sledenja testiranja PCR se izvaja trojni garancijski sistem za spremljanje okolja, vzdrževanje opreme in usposabljanje osebja.